新冠核酸檢測(cè)PCR實(shí)驗(yàn)室建設(shè)標(biāo)準(zhǔn)及規(guī)范

PCR實(shí)驗(yàn)室又叫基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室，是一種分子生物學(xué)技術(shù)，用于放大特定的DNA片段，可看作生物體外的特殊DNA復(fù)制。通過(guò)DNA基因追蹤系統(tǒng)，能迅速掌握患者體內(nèi)的病毒含量，其精確度高達(dá)納米級(jí)別。PCR是檢測(cè)新型冠狀病毒核酸最廣泛、最準(zhǔn)確的篩選和確認(rèn)方法。大規(guī)模的核酸檢測(cè)將不可避免地引起相關(guān)機(jī)構(gòu)和單位重視建立標(biāo)準(zhǔn)化的臨床PCR實(shí)驗(yàn)室。

一、新冠核酸檢測(cè)PCR實(shí)驗(yàn)室建設(shè)依據(jù)

新型冠狀病毒實(shí)驗(yàn)室生物安全指南（第二版）

GB19489-2008《實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求》

GB50346-2011《生物安全實(shí)驗(yàn)室建筑技術(shù)規(guī)范》

WS233-2017《病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全通用準(zhǔn)則》

《臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室管理暫行辦法》衛(wèi)生部

《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理辦法》衛(wèi)辦醫(yī)政發(fā)【2010】194號(hào)

《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室工作導(dǎo)則》

二、初步了解PCR實(shí)驗(yàn)室

如何避免污染是臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)的關(guān)鍵問(wèn)題。因此，實(shí)驗(yàn)室的布局、空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)設(shè)計(jì)、風(fēng)量控制等都是圍繞這一核心問(wèn)題展開(kāi)的。

1、現(xiàn)場(chǎng)要求高。需要標(biāo)準(zhǔn)的四區(qū)分離和氣流控制：試劑制備、樣品制備、PCR擴(kuò)增檢測(cè)和擴(kuò)增產(chǎn)物檢測(cè)。每個(gè)獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)區(qū)都有一個(gè)緩沖區(qū)。同時(shí)，每個(gè)區(qū)域均采用氣壓調(diào)節(jié)，使試劑和樣品在整個(gè)PCR實(shí)驗(yàn)過(guò)程中不受氣溶膠污染，減少擴(kuò)增產(chǎn)物對(duì)人和環(huán)境的污染。機(jī)械連鎖不銹鋼傳遞窗確保試劑和樣品在轉(zhuǎn)移過(guò)程中不受污染（人員分流）。

2、人員要求高。進(jìn)入PCR實(shí)驗(yàn)室，需要接受基礎(chǔ)理論、實(shí)驗(yàn)原理、標(biāo)準(zhǔn)操作、質(zhì)量保證、注意事項(xiàng)等方面的標(biāo)準(zhǔn)培訓(xùn)，并取得PCR工作證。

3、高檢測(cè)風(fēng)險(xiǎn)。在檢測(cè)過(guò)程中，由于樣品蓋的打開(kāi)、核酸提取的振動(dòng)和離心作用，可能產(chǎn)生氣溶膠，存在感染的風(fēng)險(xiǎn)。

4、防護(hù)要求高。個(gè)人防護(hù)必須按照生物安全三級(jí)實(shí)驗(yàn)室的個(gè)人防護(hù)要求進(jìn)行。

三、核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室建設(shè)的幾個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)

1、平面布局：不論是組合式還是分散式布置的PCR實(shí)驗(yàn)室，各功能房間均宜設(shè)置獨(dú)立緩沖間。

2、區(qū)域空氣流向：為避免交叉污染，PCR實(shí)驗(yàn)室空氣流向必須嚴(yán)格遵循單一方向進(jìn)行，即只能從試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)→標(biāo)本制備區(qū)→擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)→擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。

3、通風(fēng)空調(diào)：為避免交叉污染，各功能用房?jī)?nèi)空氣不能摻混?；旌鲜絇CR實(shí)驗(yàn)室應(yīng)采用新風(fēng)直流空調(diào)系統(tǒng)，當(dāng)采用新風(fēng)系統(tǒng)有困難時(shí)，各區(qū)域的空氣只能在自己的房間內(nèi)循環(huán)。

4、生物安全：按照新型冠狀病毒實(shí)驗(yàn)室生物安全指南（第二版）的規(guī)定，2019-nCoV病原體暫按照第二類病原微生物進(jìn)行管理，則樣本植被區(qū)宜為負(fù)壓或加強(qiáng)型P2實(shí)驗(yàn)室，核酸操作應(yīng)在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行。

關(guān)鍵技術(shù)措施包括：

*絕對(duì)負(fù)壓（避免室內(nèi)潛在污染外泄）

*氣流組織（室內(nèi)定向流，從低污染風(fēng)險(xiǎn)區(qū)流向高污染風(fēng)險(xiǎn)區(qū)）

*排風(fēng)無(wú)害化處理（高效過(guò)濾、高空排放）

四、核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室氣流組織建議

1、氣流組織宜采用上送下排，送風(fēng)口和排風(fēng)口布置應(yīng)使室內(nèi)氣流停滯的空間降低到最小程度。

2、在生物安全柜操作面或其他有氣溶膠操作地點(diǎn)的上方附件不得設(shè)送風(fēng)口

3、高效過(guò)濾器排風(fēng)口應(yīng)設(shè)在室內(nèi)被污染風(fēng)險(xiǎn)最高的區(qū)域，單向布置，不得有障礙；

4、不能以回（排）風(fēng)夾墻代替排風(fēng)直管，排風(fēng)高效過(guò)濾裝置與排風(fēng)總管的連接必須全部是實(shí)體風(fēng)管。

五、核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室裝飾裝修

核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室有設(shè)計(jì)理念、裝修要求、凈化空調(diào)系統(tǒng)、通風(fēng)、自控、工藝設(shè)備等幾個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)。

*材質(zhì)：隔墻及吊頂——凈化彩鋼板、地面——同質(zhì)透芯PVC地板、凈化實(shí)驗(yàn)室專用門、觀察窗；

*要求 。

1.墻面：光潔、不產(chǎn)塵積塵、耐腐蝕，易清潔消毒、無(wú)縫隙；

2.地面：防靜電、耐腐蝕、無(wú)縫隙、無(wú)滲漏；

3.陰陽(yáng)角：均用圓弧角密封處理；

4.門：必須設(shè)置自動(dòng)互鎖(機(jī)械或電子)；

*凈化空調(diào)、通風(fēng)系統(tǒng)、自控系統(tǒng)

1.避免交叉污染，采用全新風(fēng)空調(diào)系統(tǒng)；

2.樣品制備區(qū)嚴(yán)格按照BSL-2設(shè)計(jì)施工；

3.排風(fēng)系統(tǒng)全部按照要求采用高效過(guò)濾器凈化；

4.氣流組織：采用上送下排形式；

5.壓力梯度控制通過(guò)微壓差計(jì)及精密自控系統(tǒng)控制；

6.實(shí)驗(yàn)室入口處顯示房間內(nèi)各項(xiàng)指標(biāo)參數(shù)，并設(shè)置偏離報(bào)警；

*工藝設(shè)備

1.實(shí)驗(yàn)臺(tái)下部均留空，無(wú)死角；

2.全部采用不銹鋼304制作；

3.樣品制備區(qū)生物安全柜：BSC-||-B2型；

4.樣品制備區(qū)設(shè)置洗眼裝置，必要時(shí)應(yīng)有應(yīng)急噴淋裝置；

5.非接觸式操作理念(感應(yīng)式水龍頭、感應(yīng)式自動(dòng)門、互鎖傳遞窗等)；